Джесси Спенсер, полное имя Jesse Gordon Spenser, появился на свет в австралийском городе Мельбурне 12 февраля 1979 года. С детства его окружала атмосфера уважения к медицине, ведь его отец — Родни Спенсер — работает терапевтом. Его братья и сестра пошли по стопам отца. Один из братьев, Тарни — пластический хирург, специалист по лицевой пластике, Люк, второй брат, предпочёл специальность костно-пластического хирурга. Сестра Джессси — Поли — заканчивает медицинское образование.

Джесси не стал продолжателем дела отца и братьев, в интервью он полушутливо говорит: «в семье я — паршивая овца». Ещё в детстве проявилась его музыкальная одарённость, он пел в хоре мальчиков. Сейчас Джесси прекрасно владеет несколькими инструментами — играет на рояле, гитаре и скрипке. Талант к музыке, обаяние и привлекательная внешность открыли для него двери на съёмочные площадки.

Первой ролью, принесшей ему известность, была роль Билли Кеннеди в австралийском сериале «Соседи». В этом сериале он был занят в течение шести лет, вплоть до 2000 года. Затем он снимался в фильмах «Лорна Дун», «Смерть среди священников», «Побеждая Лондон», «Городские девчонки» и других. В 2004 году ему предложили роль, сделавшую его популярным — на протяжении восьми сезонов он играет Роберта Чейза в сериале «Доктор Хаус».

За роль доктора Чейза он был удостоен премии «Золотой бумеранг», которую присуждает ассоциация «Австралийцы в кино». Но Джесси Спенсер не останавливается на достигнутом и продолжает участвовать в интересных кинопроектах. Среди них можно отметить детективную драму «Расцвет», в которой он снимался вместе с одной из партнёрш по сериалу «Доктор Хаус» — Дженнифер Моррисон.

Кроме его актёрского таланта зрители отмечают и его мужскую красоту, журнал People Magazine включил его в свой список «100 самых красивых людей». К радости своих поклонниц, Джесси Спенсер пока не женат. В 2007 году было объявлено о его помолвке с актрисой Дженнифер Моррисон, но свадьба так и не состоялась.

Джесси по-прежнему очень любит музыку и даже участвует в выступлениях группы «Band From TV». Этот коллектив выступает с благотворительными концертами, в его состав входят американские актёры, снимающиеся в сериалах. Свободное время Спенсер любит проводить на море, занимаясь сёрфингом.